細(xì)胞凍存——保存細(xì)胞的主要方法

細(xì)胞凍存是將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，這樣可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，以便需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件丟失細(xì)胞，起到了細(xì)胞保種的作用。

細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原理是慢凍快融，利用這一原理可以大限度的保存細(xì)胞活力。

凍存的原理——慢凍：主要是防止細(xì)胞在冷凍過程中形成冰晶，對(duì)細(xì)胞造成損害;

復(fù)蘇細(xì)胞的原理——快融：主要是防止DMSO在液體狀態(tài)下對(duì)細(xì)胞的毒害作用，快速使細(xì)胞進(jìn)入復(fù)蘇和生長狀態(tài);

當(dāng)細(xì)胞冷到零度以下，細(xì)胞器脫水，細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高，并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶。如果緩慢冷凍，可使細(xì)胞逐步脫水，細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶;相反，結(jié)晶就大，大結(jié)晶會(huì)造成細(xì)胞膜、細(xì)胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過程應(yīng)快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結(jié)晶。

注意事項(xiàng)：

1、從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存，但為對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞。在凍存前一天換一次培養(yǎng)液;

2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時(shí)，要做好防護(hù)工作，以免凍傷;

3、凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。

4、取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套，護(hù)目鏡。此項(xiàng)特別重要，細(xì)胞凍存管可能漏入液氮，解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致爆炸。